闫新华研究员——毛皮动物疾病控制专家
中国农业科学院左家特产研究所研究员
著名毛皮动物疾病防治专家
作品介绍：
1、<<水貂肠炎病毒高免卵黄抗体的制备及应用>>
水貂肠炎病毒高免卵黄抗体的制备及应用
闫新华 闫喜军 赵传芳 王长凤 吴威 肖长灵
摘要 用水貂肠炎病毒免疫蛋鸡制备卵黄抗体，结果表明，经5次免 疫制备的卵黄抗体，于最后一次免疫第10天AGP效价达132；第30天效价为18。该抗体较 稳定，4℃保存120天、-20℃保存180天效价不变。用该抗体治疗细小病毒肠炎病犬，治愈率 达93.9%，证实用水貂肠炎病毒制备卵黄抗体是成功的，可用于犬细小病毒肠炎的治疗。
关键词 水貂肠炎病毒； 卵黄抗体； 病犬； 治疗
中图分类号 S858.9； S852.43； 文献标识码 B 文章编号 1008-0589(2000)04-0306-02
Preparation and Application of High Immune Yolk Antibody against Mink Enteritis Virus
YAN Xinhua,YAN Xijun,ZHAO Chuanfang,WANG Changfeng，WU Wei,XIAO Changling
（Speciality Institute of CAAS,Jilin 132109）
Abstract Lay eggs chicken were immunized with mink Enteri ti s Virus to prepare Yolk antibody,The result shows that yolk antibody titer of AG P is 132 at 10th day after of last one immunity of 5 times immunity and titer is 18 at 30thd.The antibody is stable,titer is not change at 4℃120d and -20℃ 180d storage.Parvovirus infected ill dogs were cured with the antibody,Cu re rate is 93.9%,It confirmed that prepared yolk antibody with mink Enteritis Vi rus is successful.It may be used to cure dog Parvovirus enteritis.
Key words Mink enteritis virus; Yolk antibody; Ill dog; Cure
应用产蛋鸡制备鸡源高免卵黄抗体用于发病鸡治疗效果十分显著［1～4 ］，抗体效价高，也较稳定，制造成本低，可大批量生产。用猪大肠杆菌异源动物病原制 备卵黄抗体［5］也证实对仔猪黄白痢有较理想的防治效果，抗体使用安全，对仔猪 不产生任何副作用。
本试验以水貂肠炎病毒(Mink Enteritis Virus,MEV)作为免疫原对蛋鸡进行免疫制备卵黄抗 体，旨在用于发生病毒性肠炎的病犬治疗。
1 材料和方法
1.1 免疫原 用猫泛白细胞减少症病毒(FPV)同步感染猫肾传代细胞，培养 4～5天出现明显的细胞病变时，用胶刷刮下细胞，离心去掉上清，收集感染细胞，再超声裂 解细胞，使病毒充分释放，然后离心收集上清，即为试验用抗原。
1.2 试验用鸡 由中国农业科学院特产研究所养犬基地提供的产蛋鸡
1.3 佐剂免疫原制备 水相：病毒抗原96份，吐温-85 4份；油相：白油90 份，司盘-85 10份，按11将水相缓慢加入油相中，用乳钵研磨，使水相完全包入油相中，最后体积仍为油相体积。
1.4 免疫方法 总计免疫5次，剂量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5m l， 每次间隔7日，胸肌多点注射，最后一次免疫7天翅静脉采血分离血清，当血清AGP效价达1 32时，收集蛋并监测其效价，直至AGP效价在18以下时停止收集。
1.5 卵黄抗体的提取 将蛋用2%的碘酊在一端消毒，揭开蛋壳0.5cm2， 倾出卵黄，加入等量的灭菌生理盐水中，搅拌均匀后加入2倍量的三氯甲烷，充分振荡后放 置过夜，3000r/min离心20分钟，上清即为卵黄抗体，AGP效价为116(20天采集的卵混合后 平均效价)，按总量加0.5%的石碳酸，无菌分装，分别放4℃保存和-20℃冻存。
1.6 卵黄抗体对发病犬治疗试验 对某养犬场临床和实验室确诊为细 小病毒肠炎感染的33只离乳仔犬用制备的卵黄抗体进行治疗，评价临床效果。
2 结 果
2.1 免疫鸡状态 蛋鸡免疫后体温、食欲均正常，接种部位无肿胀和硬结 ，吸收良好，与对照群相比，在免疫期间产蛋率下降3%。
2.2 血清抗体和卵黄抗体效价比较 通过对免疫鸡血清抗体和卵黄抗体检 测比较，证实前者比后者抗体始终高一个稀释度。
2.3 卵黄抗体持续的时间 当最后一次免疫第10天时，AGP测定卵黄抗体效 价为132，即开始收集卵，通过抗体监测，直到从收集卵之日起到第8天时下降到116； 到第20天时卵黄抗体下降到18；第24天时下降到14。
2.4 提取的卵黄抗体特性 用三氯甲烷提取的卵黄抗体清澈透明，加入防 腐剂后长时间放置不出现沉淀和絮状物，每个鸡卵平均可提取15ml，提取后的卵黄抗体效价 与未提取前用灭菌生理盐水11稀释的卵黄液抗体效价一致。
2.5 卵黄抗体的稳定性 将4℃和-20℃保存不同时间的卵黄抗体进行测定 ，结果见表1。
表1 两种条件不同时间保存的卵黄抗体效价
Table 1 Titers of yolk antibody stored at 4℃ and-20℃
保存条件
Storage condition 保存日期(天)及其效价
Storage date (day)and titer
0 30 60 90 120 180 210 240 300 360[)〗
4℃ 132 132 132 132 1 32 116 18 14 14 14
-20℃ 132 132 132 132 132 132 116 116 18 18
2.6 卵黄抗体对细小病毒肠炎感染犬治疗效果 用卵黄抗 体对33只患细小病毒肠炎离乳仔犬的临床治疗，效果十分理想，治愈31只，治愈率为93.9 %，病犬注射卵黄抗体后无不良反应，详见表2。
表2 卵黄抗体对病犬的治疗效果
Table 2 Cure effect of yolk antibody for ill dogs
病犬数(只)
Ill dog
numbers 卵黄抗体
每次用量(ml)
E.doses of
yolk antibo dy 抗体
效价
Antibody
titer 使用抗体两次
间隔时间(天)
Two tim es interval
of user antibody 治愈数(只)
一次 二次 三次
Cure numbers(single )
once twice three 未治愈数(只)
Not be cure
numbers(single) 总治愈率(%)
Total cure(rate)
33 5 116 3 9 13 9 2 93.9
3 讨 论
以水貂肠炎病毒免疫蛋鸡制备的卵黄抗体于最后一次免疫第10天抗体AGP效价达132，持续 8天下降到116，第20天下降到18，证实用异源动物病毒免疫蛋鸡也可产生较稳定的高效 价卵黄抗体。
制备的抗水貂肠炎病毒卵黄抗体于4℃保存120天、-20℃保存180天效价不变，而于4℃保存2 10天、-20℃保存300天，其AGP效价为18，仍可用于发病犬的治疗。
用制备的卵黄抗体对发病犬治疗，治愈率为93.9%，证实该
我们的服务
热门信息
推荐企业
减小字体
增大字体