刘志平  东北林业大学野生动物资源学院

 

人工授精技术是目前世界养狐业一向正在不断深入研究并且得到迅速推广的重大科技应用项目。早在1985年芬兰就有了47个狐狸人工授精站，1986年发展到了94个，拥有183名技术员。1987年北欧有近32万只种狐实施了人工授精。目前，世界许多养狐场的狐狸配种工作已完全由人工授精技术来代替。

在我国此项技术的研究，尤其在推广和应用方面相对较晚。东北林业大学野生动物资源学院动物繁殖研究室于1988年承担了黑龙江省科委“狐狸人工授精技术的研究”项目，经过了多年的研究与实践，终结了一套适合我国国情的技术与方法，并于1994年在黑龙江省杜尔伯特建立了我国第一家正式的狐狸人工授精技术服务站，1997年于山东省东营成功地举办了我国首届全国性狐狸人工授精技术培训班，为该项技术在我国的推广与应用打下了基础。

一、狐狸人工授精技术的优点与推广的意义：

1、  狐狸人工授精技术的推广可以减少种狐的.饲养数量，从而降低饲养成本。自然交配：♂：♀=1：3-4；人工授精：♂：♀=1:30-50。在加拿大采用狐人工授精技术每饲养100只母狐可节省费用900-6000美元(Holmes,1985)；在我国若按每只公狐饲养成本300元计，每饲养100只母狐可节省费用5000-8000元。

2、  用以克服兰蓝狐系与银黑狐系的属间自然杂交困难的问题，生产适销对路的毛皮产品。用银黑狐精液对母蓝狐输精生产蓝霜狐皮，每只狐的收入可提高35-100%；

3、  用于解决由于某些原因造成的母狐自然繁殖困难的问题，从而提高种母狐的利用率。

4、  可以提高种狐优良基因的扩散和育种效率，芬兰大体型蓝狐的培养即是例证；在我国， 目前广泛应用人工授精技术实现蓝狐品种改良的目标，每张狐皮可增收100-150元。

5、  狐狸人工授精技术实施会使我国毛皮兽养殖业的科技含量提高，大大增加了农民和渔民的收入。我国的毛皮兽有95%以上由个体农民和渔民饲养，该项技术的推广会增加他们的经济收入，可提高他们的生活水平，有利于社会的稳定。此外，毛皮兽养殖业的发展，可使那些不能用作人类食品的畜禽鱼类及下脚料（如鸡、鸭肠、血液等）资源得以充分利用，产生比家畜家禽养殖更大的经济效益。

人工授精技术应用于养狐生产可给经营者带来明显的经济效益，但技术人员短缺有碍于该技术的推广。实践证明：分期分地区的举办短期专业技术培训班是行而有效的。技术培训一般分为基础理论培训和实践操作练习两部分，由具有实践经验的专业技术人员讲解基础理论知识及有关操作注意事项，并指导学员完成实际操作，使学员理解技术的基本原理，并能按照操作规程独立操作。基础理论知识包括狐的生殖器官解剖，生殖生理以及人工授精各个环节的基本原理必须遵循的基本原则操作注意事项和影响母狐受孕率的因素等。实验教学必须准备可供学员练习操作的实验动物，可从准备淘汰的成年狐中留取一定数量作为实验用狐并于6月下旬——7月上旬皮下埋植10-14mg的褪黑激素，使其提前1-2个月进入繁殖期状态。练习时，首先由教师进行示范操作，再由学员在教师指导下分别进行采精和输精操作练习，要使每个学员都有动手操作的机会，所以必须准备足够数量的练习用公母狐。子宫内输精对于初学者难度较大，可通过母狐生殖器官解剖观察以及在离体子宫操作练习等方法逐渐体会加以掌握。要想达到熟练的程度，必须进行大量的实际操作练习。

二、操作间：

        清静卫生、便于操作是建立狐人工授精操作室的两个基本原则，同时还需设置相应的隔离防疫设施；房间大小由工作需要而定，一般15-20平方米即可；分两部分，最好设置隔断，使用前彻底消毒。室内应保持干净，不存放其它杂物，不能有灰尘，同时避免阳光直接射入。室内温度应维持在16-22℃；空气要清新，不能有异味，特别是挥发性化学物品如：酒精、来苏儿以及紫外线灯等所造成的空气污染。工作人员应着工作服无关人员禁止出入。

三、设备与机械：

操作台两个，可用普通办公桌代替；狐专用保定架一个；消毒柜一台，可用红外线电烤箱代替；显微镜一台，载物片盖玻片若干；恒温水浴锅一台；集精杯、输精器 、阴道插管、精液稀释液及一次性2-3ml医用注射器若干；洗涤消毒盆3-4个。另外，还需准备好消毒用酒精、纱布、脱脂棉以及肥皂、毛巾等；蒸馏水需满足供应。

所有器械在使用前都要进行刷洗和消毒，特别是与母虎生指导和敬业有直接和间接接触的如：集精杯、阴道插管、输精器、发情检测器探头和棉签等。可使用0.1%的新洁尔灭溶液浸泡2-3小时后用清水刷净，在用蒸馏水冲洗2-3遍，最后放入120℃烘箱内烘干即可

四、精液的获取：

人工获取动物精液的方法有多种，采用手按摩法采集狐精液以其操作简便精液质量优良，在生产中被普遍采用。按摩采精，是以操作者手指按摩公狐阴茎的性敏感区域，从而诱发公狐射精的一种方法，它是动物自然射精机理的一种粗放模拟。公蓝狐性敏感区位于阴茎跟部，阴茎球上方。按摩时操作者以右手拇指中指和食指如握笔式有规律的上下轻轻滑动，此时公狐出现交配动作，待阴茎球稍有突起，再顺势反手将阴茎经由狐两后腿之间拉向后方，继续按摩；左手握集精杯随时做好接精准备。操作者的手法应配合公狐的动作，操作要连贯，一气呵成。公狐的精液一般分为三段射出，初段为少量精清（水样透明），中段为浓缩精液（乳状混浊），末段仍为精清，只需接取中段的浓缩部分。操作时应留意不得将任何杂物混入精液，如：粪便、尿液、灰尘、毛发等，所以有必要在采精前对公狐阴茎周边进行剪毛和清洗处置，操作者手臂也应洗净消毒。公银黑狐的采精除按照上述方法外，还应同时按摩器阴茎龟头的尖端。

五、精液质量检查：

此项检查应迅速而准确。精液的外观检查包括：精液量、精液颜色和气味等。其中，精液量可由集精杯刻度读取。正常精液为乳白色均匀不透明，若采到的精液呈现黄、红、绿等颜色或有特殊气味以及混有杂物则不能使用。

精液经外观检查合格后再进行显微镜检查。取一小滴精液样本滴于载玻片上，轻轻盖上盖片，37℃条件下首先用100倍镜头调试焦距，图像清晰后转入400倍镜下检查精子的密度与活力，而畸形率在小于20％时可以忽略不计。其中：

精子活力＝视野中直线前进运动精子的百分数。

若视野中有70％精子作直线前进运动则活力记作0.7或7，80％记作0.8或8，此为十级评分法；精子密度可用血球计数板计算但比较繁琐，实际工作中常以视野中精子的个数估测其密度，它是根据数学计算得出：在400倍视野下精子数每增加10个则精子的密度递增一千万，亦即视野中有50个精子，密度为5千万；有70个，密度为 7千万 。根据以上检查结果可计算出某份精液的有效精子数，即：有效精子数＝精液量×密度×活力。比如，精液量＝0.9ml，密度＝12亿/ml,，活力＝0.9，则该份精液有效精子数＝0.9ml×12亿/ml×0.9＝9.72亿≈10亿。那么该份精液可稀释到10ml。如果精液浓度较大可在低倍稀释后镜检 。

六、精液稀释与保存：

精液稀释的目的除扩充容量外，更重要的是使精子在离体状态下仍能保持其受精能力，因此，所用稀释液的理化及生物学特性必须与之相适应，否则会使精子性状发生改变，其受精能力下降以至于丧失。在狐狸精液的保存方法中，目前以常温保存效果最佳。良好的稀释精液应具备可被精子利用的营养物质（如：果糖、卵黄等）；抵御外界不利环境因素的保护物质（如：缓冲物质、抗菌素等）和抑制精子运动以减少自身消耗成分（如：弱酸性）等。同时还需考虑溶液中离子的浓度以防止精子的水分过于丢失或发生膨胀。为了节省时间和配制过程中的繁琐，目前广泛使用预先配制好的狐专用商品稀释液，这种稀释液需要在特定的无菌条件下严格配制，所用成分亦需经过处理，密封保存在低温环境下，开封后一次性使用。

无论使用哪种稀释液，在使用之前都需要对其保存效果予以检测，精液稀释后在2－3h内活力无明显下降方可使用。

稀释方法：  采精前应先将水浴调至37－38℃，将稀释液放入水浴中平衡温度，对采到的精液首先进行低倍稀释（2－4倍），然后镜检，根据镜检精子的浓度决定最终稀释倍数。精液稀释完后，要再次对稀释后的精液质量经镜检予以确认，最后放入水浴中等待输精。

注意：应将稀释液沿应将稀释液沿集精杯壁缓慢加入到精液中，混均不可强烈振动或吹打，逐级稀释，防止一次稀释过量。精子浓度过低不宜用增加输精容量的方法补偿，因为子宫的容积有限。

七、发情鉴定：

母狐最佳输精时间的选择是人工授精工作中难度最大、而且需要花费大量人力和时间的关键环节。准确的发情鉴定可减少输精次数，有利于节省精液和提高工作效率。狐为一次性季节发情，自发性排卵动物。自然状态下母狐只有在排卵期前后方可接受交配。由于精子和卵子在母狐生殖道内存活时间有限，所以输精时间越接近于母狐排卵期越有利于母狐受孕，因为只有新鲜的精子和卵子结合才能获得良好的受精效果。准确的发情鉴定是保证人工授精技术得以有效实施的基本条件之一。

大多数母狐根据外观表现可大致判断其发情状况。母狐进入发情期，首先有食欲降低、鸣叫、尿频等行为学变化，其外阴逐渐肿胀变大、变硬、光滑而有光泽，这时母狐一般拒绝交配，此期大约可持续3－5天。随后母狐外阴开始回缩（有皱褶）、便软、色泽黯淡，此时母狐接受交配，为输精适宜时机，此期可持续2－4天，以上检查方法需要花费大量的人力和时间，同时带有一定的主观性，难以适应大型养狐场集中人工授精的需要。

早在1980年，挪威学者默莱尔等人发现了母狐的发情行为与阴道内的电阻值变化有密切的相关性，据此研制出了母狐发情检测器，提高了工作效率和检测的准确度。使用方法：一人用颈钳保定母狐，尾部向上暴露母狐阴部检测者将监测器探头轻轻插入母狐阴道，使其前端抵达子宫颈口附近，按下把柄上的开关，液晶显示屏上即显示出一定数值，记录数值，将探头轻轻拉出，进行消毒处理。每天测定一次。数据分析及最佳输精时间选择：随着母狐发情的进展，电阻值逐渐升高，达最大值然后开始下降。最佳输精时间：蓝狐为电阻值下降的第二天；银黑狐为电阻值下降的当天。

根据连续测定的电阻值可绘出母狐发情过程阴道电阻值变化曲线，共有四种类型：一型表现为电阻值升高较快，下降的也较快；二型表现为电阻值升高和下降的速度较慢；三型电阻值出现两次高峰，以第二次下降为准；四型电阻值在高峰时持续2－3天然后才下降，以高峰的第三天为准。

阴道内细胞学检查：发情母狐阴道内细胞根据形状可分为两种类型：一种边缘为弧线的称“圆形细胞”；一种边缘为直线和棱角的称为“角化细胞”。 随着母狐发情进展，阴道内角化细胞比例逐渐增大，圆形细胞比例逐渐减小，直到几乎全部为角化细胞并可持续2－3天，然后出现圆形细胞并逐渐增多，角化细胞逐渐减少，发情旺期母狐

阴道内角化细胞占最大比例。检查方法：将消毒过的棉签轻轻插入母狐阴道内沾取少量分泌物在载玻片上轻轻滚动，然后镜检。在大型养狐场此项工作是人工授精技术操作中需要投入大量人力和时间，而且为最容易出现失误的关键环节，尤其在母狐发情旺期。为了提高工作效率和减少失误采用以发情检测器为主的综合判定法可获得良好的效果。

八、输精：

子宫内输精是使用专用的输精器械将合乎标准的精液输入到母狐子宫内的一种操作方法。它的特点是操作简便，母狐受孕率高，但对于初学者其操作具有一定的难度，需要从事人员必须在正式培训后经过大量的实践操作操作练习方可熟练掌握。了解母狐生殖器官的结构和功能，对于学好这一技术很有必要，特别是子宫颈的解剖位置。母狐的生殖器官由卵巢、输精管、子宫、子宫颈和外阴组成，卵子由卵巢排出后被运送到输精管的壶腹部与精子结合成受精卵，受精卵再被运送到子宫，在此着床并发育成胎儿。狐在自然交配时，精子要到达受精部位必须首先通过子宫颈这一道“关卡”，子宫颈 位于距阴道外口处大约8－10cm阴道底部偏上方，有细微的管腔连通子宫和阴道，子宫颈向阴道的开口与阴道腔纵轴大约呈45度角向下斜向后方。子宫颈为一括约肌样组织，在非繁殖季节较小、松软且宫颈口关闭；发情时显著增大且具有一定的硬度和弹性，宫颈口稍有开张，在子宫颈开口下方是一“窝状”腔室，称阴道穹窿，是阴道深处最末端。如果将母狐阴道比喻为一只底部呈半球状水平放置的试管，那么子宫颈即位于试管壁与半球状试管底交界处的正上方，而试管底部即为阴道穹窿。狐在自然交配时精液蓄积于阴道穹窿，再依赖“锁扣”机制时精子得以缓慢的进入子宫。

操作程序：首先由一人将母狐固定好，可置于保定架内，也可使用颈钳将母狐悬于空中；对母狐外阴擦洗消毒；连接注射器和输精器，吸取精液；沿套管插入输精器，右手握输精器以拇指、食指和中指连同套管外测末端一起固定于相应位置（此时输精器前端位于子宫颈附近）并轻轻向上推动；与此同时，左手于母狐腹部以虎口上托并合拢拇指、食指和中指，找到子宫颈将其固定；调整输精器位置使其前端弯曲向上触及子宫颈开口处；双手配合将输精器前端轻轻插入子宫颈内；右手轻轻推动注射器将精液缓缓注入；轻轻拉出输精器、阴道套管，输精结束。

输精效果判定：1、输精器插入和拉出时有少许阻力；2、子宫颈如“戒指”套入手指，摆动输精器子宫颈会随之运动，二者不分离；3、精液注入后不倒流，套管取出无精液残留，无血液。

说明：1、小心操作，动作温和，避免造成子宫颈的机械伤害；2、缓慢注入精液，降低精子所受的机械打击；3、输精量以.0.7－0.8ml为宜，含有7－8千万个有效精子，不宜过大；4、输精器不宜插入过深，通过子宫颈即可；5、输精次数不宜过多，每天输精一次连续2－3天或隔天一次共两次即可，在准确鉴定母狐发情的前提下只输精一次，同样可以获得良好受孕率；6、发情好的母狐多表现安静，反之发情状况欠佳；7、当年母狐较经产母狐子宫颈小且柔软，操作有一定难度；8、输精障碍时不必勉强操作，可在找到原因后再行处置。